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實驗原理：
1：TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。
2：顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。
3：用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
4：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。

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計算方法如下：大鼠雌三醇檢測試劑盒
→ 以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標）。
→ 在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數。
→ 或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式。
→ 計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

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實驗時注意事項：
1、實驗應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫，稀釋過后的標準品應丟棄，不可保存。
2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好，不同批號的試劑不要混用，保質前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉感染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混合試劑盒里的各種成分及樣品。
6、底物A易揮發，避免長時間打開蓋子，底物B對光敏感，避免長時間暴漏于光下，避免用手接，實驗完成后應立即讀取OD值。
7、加入試劑的順序一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
8、按照說明書中標明的時間，加液的量及順序進行溫育操作。

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