原理
ELISA試劑盒其根本原理可概括為：將特異的抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)和酶學(xué)催化反應(yīng)相聯(lián)絡(luò)，以酶促反應(yīng)的擴(kuò)展作用來(lái)顯現(xiàn)初級(jí)免疫學(xué)反應(yīng)。因而，酶免疫技術(shù)一般均有兩部分構(gòu)成，即一次或數(shù)次免疫學(xué)反應(yīng)和一次酶促反應(yīng)。抗原、抗體發(fā)生特異聯(lián)絡(luò)進(jìn)程中，設(shè)法引入酶聯(lián)絡(luò)物，如酶符號(hào)的抗抗體，然后參與酶的底物，在酶催化下生成有色商品，反映出被測(cè)定抗原或抗體的量。
操作流程、類型及特征
操作流程：
檢查抗體多用直接型elisa。以純化抗原包被載體，經(jīng)4℃過(guò)夜，以無(wú)關(guān)蛋白封閉起碼2小時(shí)以上，參與待測(cè)樣品，室溫孵育1小時(shí)，洗刷潔凈后加酶標(biāo)抗體，再經(jīng)室溫孵育、洗刷后，以底物顯色，顯色到必定程度停止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上讀效果或以肉眼區(qū)分。
類型：ELISA試劑盒具體方法的類型繁復(fù)，試劑的標(biāo)準(zhǔn)化疑問(wèn)還未終究處理，溫育的時(shí)間、溫度、洗刷液的種類及洗刷次數(shù)等都是影響測(cè)定的要素。但參看以上根本進(jìn)程，無(wú)論怎樣改變，均離不開(kāi)抗原-抗體反應(yīng)、酶標(biāo)抗體的免疫學(xué)反應(yīng)及酶催化作用。
特征：1、敏感性高，可檢出濃度在ug~mg/ml水平；2、特異性強(qiáng)；3、重復(fù)性好；4、敏捷、簡(jiǎn)練、便宜。
試驗(yàn)條件
固相載體：可作為固相載體的物質(zhì)很多，如：纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現(xiàn)；試管、微量反應(yīng)板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯成品，其吸附性zui棒。固相包被的機(jī)制一般不外乎物理吸贊同共價(jià)交聯(lián)，
封閉：以無(wú)關(guān)蛋白占有載體上未被包被的空位，常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測(cè)樣品：稀釋度要適合，濃度太大會(huì)發(fā)生非特異性吸附構(gòu)成假陽(yáng)性，過(guò)火稀釋會(huì)影響抗原-抗體之間的免疫學(xué)反應(yīng)。選擇zui適稀釋度，在試驗(yàn)體系中取光密度在1.0支配的稀釋度為宜。
酶聯(lián)絡(luò)物：運(yùn)用高質(zhì)量的酶聯(lián)絡(luò)物是elisa成功的關(guān)鍵。
注意事項(xiàng)
ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫技術(shù)的試劑標(biāo)準(zhǔn)化疑問(wèn)沒(méi)有*處理，溫育進(jìn)程的時(shí)間、溫度、洗刷液的種類及洗刷次數(shù)都是影響終究測(cè)定的要素。為使試驗(yàn)得到滿足的效果，在操作進(jìn)程中應(yīng)作到
1、每次試驗(yàn)都必須設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
2、封閉要*。
3、洗刷要測(cè)定。
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